Objavljen rad u časopisu Applied Microbiology and Biotechnology

Objavljen rad u časopisu Applied Microbiology and Biotechnology
10.09.2024

U fokusu ove publikacije nalaze se sintaze neuraminske kiseline, važna ali nedovoljno istražena skupina enzima. Kroz istraživanje je provedena detaljna analiza sintaze neuraminske kiseline iz Neisseria meningitidis i novog enzima, PNH5, dobivenog iz metagenomske knjižnice. Novi enzim pokazao je visoki stupanj sličnosti s ranije poznatim sintazama neuraminske kiseline, uz razliku u optimalnoj pH vrijednosti od 5,5 što ga čini prvim prijavljenim enzimom iz ove obitelji koji preferira kiselu pH vrijednost.

Ovo svojstvo predstavlja vrijednu informaciju za izolaciju produkta bez potrebe za izmjenom medija, jer sijalinske kiseline kristaliziraju pri kiselim uvjetima. Također, kroz rad je sustavno proučavan učinak različitih metalnih kofaktora na aktivnost enzima, tj. Co2+, Mn2+ i Mg2+. U potpunosti je razjašnjena kinetika sinteze neuraminske kiseline te je predložen odgovarajući matematički model. Kroz istraživanje stabilnosti enzima otkriveno je da pročišćeni enzim pokazuje promjene u svojoj strukturi tijekom vremena, što uzrokuje pad njegove aktivnosti i koncentracije proteina. Operacijska stabilnost enzima za sintazu neuraminske kiseline iz N. meningitidis je izvrsna, dok je u slučaju PNH5 uočen određeni pad aktivnosti pri višoj koncentraciji supstrata. Dobiveni rezultati predstavljaju čvrstu osnovu za buduću primjenu ovih enzima u sintezi sijalinskih kiselina.

Rezultati ovih istraživanja nastali su tijekom rada na projektu C-C Bond Formation Using Top Performing Enzymes (CC-TOP, šifra projekta 956631) financiranom od strane Europske komisije kroz Obzor 2020 (H2020-MSCA-ITN-2020).